牛朊病毒 （Prion） ELISA检测试剂盒 说明书80 人阅读发布时间：2023-11-22 17:27
牛（Bovine）朊病毒 （Prion）ELISA检测试剂盒 使用说明书
检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被朊病毒抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中朊病毒 （Prion）的存在与否。
试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
3. 待测样本孔加待测样本10Μl，样本稀释液40μL；
4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00； 阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性资料格式：牛（Bovine）朊病毒 （Prion）.doc
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